尊龙凯时人生就博推出的乙型流感病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒,依据探针法荧光定量PCR原理研发,具有以下特点:
产品特点
1. 即开即用:用户仅需提供样品DNA模板即可进行检测。
2. 高灵敏度:引物及其它组分经过优化,确保高灵敏度。
3. 附带阳性对照:提供阳性对照,便于区分假阴性样品。
4. 高特异性:引物根据乙型流感病毒DNA序列的保守区域设计,不会与其他生物样本DNA发生交叉反应。
5. 定性与定量:支持定性检测与定量检测,定量检测的线性范围至少为5个数量级。
6. 充足的试剂量:足够进行50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。
7. 科研专用:本产品仅供科研用途。
使用方法
一、DNA提取
使用自选方法提取和纯化样品DNA,本试剂盒与市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。
二、稀释标准曲线样品
(注意:阳性对照浓度较高,稀释操作应在独立区域进行,以避免污染。)
1. 标记6个离心管,分别标记为7,6,5,4,3,2。
2. 向每个管中添加45μL DEPC-H2O。
3. 在7号管中加入5μL的阳性对照,经过稀释后得到1×10E7拷贝/μL的标准曲线样品。
4. 依次在6、5号管中进行相应稀释,直至获得6个不同浓度的标准曲线样品。
若不制作标准曲线,只需将阳性对照稀释到1×10E5拷贝/μL即可。
三、试剂配制
准备N+2个qPCR管(包括N个待检样品,1个阴性对照,及6个阳性对照),向各PCR管中加入指定组分 (详细说明见说明书)。
四、添加模板
向qPCR管中分别加入2μL模板,顺序为阴性对照(DEPC-H2O)、待测样品模板及阳性对照,然后进行离心处理后立即进行扩增反应。
五、扩增反应
将PCR管放入PCR扩增仪器中,根据说明书设置扩增程序进行反应。
六、结果分析
1. 如制作标准曲线,则以阳性对照浓度的log值为横轴,以Ct值为纵轴绘制标准曲线,再根据待测样品的Ct值推算其DNA浓度的log值。
2. 如未制作标准曲线,根据结果判断:阳性对照Ct值<30,并显示明显的S型曲线;阴性对照Ct值应为38或无Ct值;样本检测中,Ct值<35则为阳性,Ct值在35-38范围内则需进一步确认。
运输及保存
需在低温下运输,保存温度应为-20℃,有效期为一年。阳性对照需单独存放,避免与其他试剂交叉污染。
尊龙凯时人生就博致力于为用户提供高质量的医疗检测试剂,确保每一次检测的准确性和有效性。